一、方案背景與目標(biāo)

新鮮農(nóng)產(chǎn)品的游離氨基酸特征譜可反映其營養(yǎng)價值（如支鏈氨基酸助力運(yùn)動后恢復(fù)）與風(fēng)味特征（如 L - 谷氨酸呈鮮味、L - 甘氨酸呈甜味），是育種項(xiàng)目關(guān)注的核心性狀。本方案旨在提供一種無需衍生化、樣品制備簡單的 LC/MS/MS 方法，實(shí)現(xiàn)番茄勻漿中游離氨基酸的精準(zhǔn)定量分析。

二、核心儀器與試劑

1. 儀器設(shè)備

分析系統(tǒng)：EClassical 3200L 高效液相色譜儀 + MS2 Vertical 9100 三重四極桿質(zhì)譜儀

控制與數(shù)據(jù)處理軟件：Simplicity? M 3Q 軟件平臺

輔助設(shè)備：3kDa 過濾器、離心機(jī)、Triple Red 水純化儀

2. 主要試劑

乙腈、甲酸、氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品、氘化氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品（內(nèi)標(biāo)）、去離子水（由 Triple Red 水純化儀制備）

三、實(shí)驗(yàn)流程

1. 方法轉(zhuǎn)移與參數(shù)優(yōu)化

將 Syngenta 氨基酸含量測定內(nèi)部方法直接轉(zhuǎn)移至 EClassical 3200L 系統(tǒng)，無需修改；通過注入高濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液（L1 級），優(yōu)化 MS/MS 離子對的入口電壓與碰撞能量。

2. 校準(zhǔn)曲線制備

配制 7 點(diǎn)校準(zhǔn)曲線，包含多種濃度的目標(biāo)氨基酸與固定濃度的氘化內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)濃度見表 1）；

內(nèi)標(biāo)種類：2,3,3,3-d4 - 丙氨酸、檸檬酸 - 2,2,4,4-d4、DL - 谷氨酸 - 2,3,3,4,4-d5、DL-d5 - 苯丙氨酸等。

3. 樣品前處理

番茄樣品勻漿后離心，取上清液；

用 3kDa 過濾器過濾上清液，所得液體用去離子水稀釋 400 倍（確保濃度在校準(zhǔn)范圍內(nèi)）；

加入與校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品同水平的氘化內(nèi)標(biāo)。

4. 分析參數(shù)設(shè)置

LC 參數(shù)：柱溫 30℃；流動相 A 為 “水 + 0.2% 甲酸”，流動相 B 為 “乙腈 + 2% 水 + 0.2% 甲酸”；梯度洗脫程序按時間調(diào)整流速與 A/B 比例（詳見表 2）；

質(zhì)譜參數(shù)：ESI 離子源（正電壓 5500V、負(fù)電壓 - 4000V），離子源溫度 315℃，HSID 溫度 200℃，干燥氣 60，霧化氣 350；各氨基酸離子對與碰撞能量見表 3。

四、方案結(jié)果

分離與靈敏度：該方法可實(shí)現(xiàn)不同游離氨基酸的良好色譜分離，MS2 Vertical 9100 質(zhì)譜檢測器靈敏度高，能精準(zhǔn)捕捉目標(biāo)化合物信號；

線性與檢出限：所有氨基酸線性相關(guān)系數(shù) R2 均 > 0.98（部分如天門冬酰胺 R2=0.999），LOQ（定量限）低（低 0.005μg/mL，如組氨酸、甜菜堿、脯氨酸等），滿足微量分析需求（詳見表 5）；

代表性數(shù)據(jù)：天門冬酰胺、絲氨酸等氨基酸的校準(zhǔn)曲線線性優(yōu)異（見圖 1），不同濃度校準(zhǔn)品與番茄樣品的色譜圖重疊度高，分離效果清晰（見圖 2）。

五、方案結(jié)論

Syngenta 內(nèi)部方法可直接轉(zhuǎn)移至依利特 EClassical 3200L-MS2 Vertical 9100 系統(tǒng)，無需修改，適用性強(qiáng)；

方法無需對游離氨基酸進(jìn)行衍生化，樣品前處理簡單、效率高；

所有目標(biāo)化合物檢測選擇性好、靈敏度高、線性關(guān)系優(yōu)異，可高效用于番茄勻漿中游離氨基酸的定量分析。

注：更多詳情（含完整表格 1-5、譜圖數(shù)據(jù)）請下載 PDF 文件查看。