簡介

維生素是人體內(nèi)各種代謝功能所必需的微量營養(yǎng)素。維生素可分為水溶性和脂溶性維生素。脂溶性維生素 (FSV) 主要由維生素 A、D、E 和 K 組成，儲存在肝臟和脂肪組織中，消除速率比水溶性維生素慢。因此，人體不需要經(jīng)常補充 FSV。FDA 建議人體 FSV 推薦攝入量 / 耐受量見表 1。

由于脂溶性維生素的溶解度有限，食品、食品添加劑和補充劑中的 FSV 一般主要采用正相液相色譜法進行分析，在樣品制備和后續(xù)色譜分析中通常使用二氯甲烷作為主要有機溶劑。但是由于與所用溶劑有關的固有危害，以及較高處置成本，這種方法可能并不理想。

當使用反相液相色譜法 (RPLC) 時，將脂溶性維生素溶解到適當溶劑中是一項挑戰(zhàn)。還必須考慮到任何額外的樣品步驟將增加分析時間。此外，通過 RPLC 分析脂溶性維生素時，由于二氯甲烷常被用作樣品稀釋劑，所以避免因溶劑效應而導致的早期洗脫物出現(xiàn)色譜峰變形是一項重大挑戰(zhàn)。

基于上述考慮，本文提出了分析物在 100% 二氯甲烷中溶解 / 稀釋并通過反相 UHPLC-MS/MS 分析 FSV 的一種方法。

實驗

溶劑和標準品

使用的所有溶劑、試劑和稀釋劑均為 HPLC 級或更高。

所有稀釋均使用 HPLC 級二氯甲烷。

FSV 標準品，包括維生素 A 醋酸酯 (視黃醇醋酸酯)、D3 (膽鈣化醇)、D2 (麥角鈣化醇)、K2 (甲基萘醌)、E (生育酚)、E 醋酸酯 (生育酚醋酸酯)、K1 (葉洛醌) 和 A 棕櫚酸酯 (視黃醇棕櫚酸酯)，均從密蘇里州圣路易 Sigma-Aldrich Inc. 獲得。使用二氯甲烷制備 100μg/mL FSV 工作標準品。為了防止標準品不穩(wěn)定，所有儲備和工作標準品均冷藏 (4°C) 存儲，并且只使用 2mL 琥珀色 LC 小瓶。

硬件 / 軟件

色譜分離使用依利特科技 UHPLC 系統(tǒng)及依利特科技 MS2 Vertical 9100 液相質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)檢測器。所有儀器控制、分析和數(shù)據(jù)處理均使用軟件平臺進行。

方法參數(shù)

LC 和 MS/MS 方法參數(shù)分別見表 2、表 3、表 4。

結果和討論

如圖 1 所示，在不到 15 分鐘的時間內(nèi)實現(xiàn)了 8 種維生素良好色譜分離，如圖 2 所示，5 次重復檢測的重疊顯示了出色的色譜重現(xiàn)性。三組 10 次重復進樣使用二氯甲烷制備的 100μg/mL FSV 標準品，所有峰面積的 % RSD 均小于 3%(表 5)。這表明進樣之間擁有出色的重現(xiàn)性。

結論

通過減少 LC 進樣量和提高所使用色譜柱的內(nèi)徑，反相色譜法可直接應用于二氯甲烷中制備的脂溶性維生素分析，并且不會因溶劑效應導致的早期洗脫分析物色譜峰失真而造成色譜性能損失。獲得的面積 % RSD<3%，表明方法重現(xiàn)性出色。結果表明，該方法適用于脂溶性維生素的反相 UHPLC-MS/MS 分析。

參考

U.S. Food and Drug Administration (FDA), Guidance for Industry: A Food Labeling Guide (14. Appendix F), http://www.fda.gov/Food/GuidanceRegulation/GuidanceDocumentsRegulatoryInformation/labelingnutrtion/ucm064928.htm

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