在科研、醫(yī)藥檢測這些領(lǐng)域，液相色譜儀是常用的分離工具。不少人遇到過這樣的情況：儀器是新款智能型的，可實驗時總出現(xiàn)峰形拖尾、數(shù)據(jù)不穩(wěn)定的問題，其實問題往往出在色譜柱的裝填質(zhì)量上。

色譜柱就像儀器的 “心臟”，分離效果全靠它，而裝柱方法選得對不對、操作到不到位，直接決定色譜柱好不好用。下面就說說裝柱方法怎么選，還有那些不能忽略的技術(shù)要點。

一、裝柱方法怎么選？看兩個關(guān)鍵

選裝柱方法不用盲目，先搞清楚固定相粒徑和色譜柱尺寸這兩個參數(shù)就行。

1. 濕法裝填：小粒徑固定相常用

如果固定相粒徑小于 20-30μm，比如實驗室常說的 3μm、5μm 填料，基本都用濕法裝填，這也是現(xiàn)在分析型色譜柱的主要方式。

具體是把固定相粉末混在合適的溶劑里，做成均勻的 “勻漿液”，再用高壓泵把勻漿液壓進(jìn)空柱管里。高壓能讓填料快速、緊密地沉下來，減少空隙，這樣裝的柱子分離效果好，峰形也規(guī)整。

不過要注意，固定相粒徑越小，裝填難度越大。要是柱子內(nèi)徑超過 20mm，需要的壓力更高，操作起來也更復(fù)雜。

2. 干法裝填：只適合大粒徑固定相

要是固定相粒徑大于 25μm，可以試試干法裝填，也就是常說的 “敲擊 - 裝填”。操作很簡單，不用配溶劑，直接在干燥狀態(tài)下敲一敲、振一振柱管，讓填料慢慢密實就行。

但干法有個明顯的缺點：填料不夠緊密，均勻性也差，分離效果和數(shù)據(jù)穩(wěn)定性都比不上濕法。所以做高效液相色譜分析時，一般不用干法，只在對分離精度要求不高的預(yù)處理環(huán)節(jié)偶爾用用。

表 1：裝柱方法選擇對照表（按固定相粒徑 & 場景）

二、大尺寸色譜柱裝柱：兩種壓縮技術(shù)解決難題

做藥品純化、天然產(chǎn)物提取這類實驗時，常會用到內(nèi)徑超過 20mm 的大尺寸色譜柱。這種柱子用普通濕法裝填，容易出現(xiàn)中間松、邊緣緊的情況，分離效果不穩(wěn)定，這時候就得用 “柱長壓縮技術(shù)”。

1. 徑向壓縮：從外面 “擠緊”

就是從柱管外壁施加均勻的壓力，像握東西一樣把柱管和里面的填料往中間擠，讓填料更密實，消除柱壁和填料間的空隙。適合柱管有一定彈性的大柱，操作時要注意壓力均勻，別擠變形了。

2. 軸向壓縮：用 “活塞” 往下壓

柱里面有個可移動的活塞，從填料床頂端往下施壓，把填料壓實。這種方式對壓力控制要求高，但能保證柱床上下均勻，適合長尺寸的制備柱。

表 2：大尺寸色譜柱（內(nèi)徑＞20mm）壓縮技術(shù)對比?

三、裝柱質(zhì)量怎么把控？三步不能少

選對方法還不夠，裝完后的質(zhì)量控制也很關(guān)鍵，不少人忽略這步，后實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)，反而浪費時間。

1. 備好專業(yè)設(shè)備

濕法裝填得有高壓泵、勻漿罐這些設(shè)備，尤其是高壓泵的壓力穩(wěn)不穩(wěn)定，直接影響裝填效果。別想著省設(shè)備錢，劣質(zhì)設(shè)備很容易裝出不均勻的柱子。

2. 測柱效：用數(shù)據(jù)說話

裝完柱子后，一定要用標(biāo)準(zhǔn)品測理論塔板數(shù)、不對稱因子。理論塔板數(shù)越高，柱子分離效果越好；不對稱因子接近 1，峰形越規(guī)整。這是判斷柱子能不能用的唯一標(biāo)準(zhǔn)，不能憑感覺。

3. 不合格就重裝

要是測出來柱效低，或者峰形嚴(yán)重不對稱，別想著湊合用，直接重新裝填。勉強用的話，實驗數(shù)據(jù)會不準(zhǔn)，還可能影響后續(xù)結(jié)論。

表 3：裝柱質(zhì)量控制關(guān)鍵步驟表

四、常見問題解答

Q1：3μm 和 5μm 固定相，裝柱壓力一樣嗎？

不一樣。5μm 固定相裝柱壓力一般 20-30bar，3μm 的顆粒更細(xì)，需要 30-40bar 以上的壓力，才能讓填料緊密沉降。

Q2：干法裝填的柱子能做藥品雜質(zhì)檢測嗎？

不建議。藥品雜質(zhì)檢測對精度要求高，干法柱子分離效果和穩(wěn)定性都不夠，容易導(dǎo)致檢測結(jié)果有偏差。

Q3：大尺寸制備柱裝完第一次用要注意什么？

先用純?nèi)軇ū热缂状肌⒁译妫┑土魉贈_ 2-3 小時，把柱床里的氣泡排掉，再用流動相平衡柱子，等基線穩(wěn)定了再進(jìn)樣，這樣能減少柱床擾動，延長柱子壽命。

表 4：裝柱常見問題解答表

裝柱方法口訣

小粒徑（＜20μm）用濕法，大粒徑（＞25μm）用干法；分析柱用標(biāo)準(zhǔn)濕法，制備柱（＞20mm）加壓縮；裝完必測柱效，不合格就重裝。

不管是做科研還是工業(yè)檢測，色譜柱裝填質(zhì)量都是關(guān)鍵。把這些技術(shù)要點弄明白，不僅能提高實驗效率，還能保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，讓智能液相色譜儀真正發(fā)揮作用。