液相色譜柱是液相色譜分析系統(tǒng)的核心部件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)不準(zhǔn)，很多時候就看它用得對、護(hù)得好與否。做好正確使用和日常維護(hù)，才能讓每一次分析數(shù)據(jù)都靠譜。

一、色譜柱使用說明

使用前注意

新色譜柱里的儲存液，一般是出廠評價報告上指定的流動相。用之前先確認(rèn)一下這儲存液和你要用到的樣品流動相能不能混溶，別直接混用出問題。要是反相色譜里，你用的洗脫劑是高濃度鹽或者緩沖液，記得先換成10%低濃度有機(jī)相洗脫劑過渡下，這樣能避免鹽析堵了柱子。

流動相要求

配制流動相建議用色譜純的有機(jī)溶劑和超純水，要是流動相里含鹽，應(yīng)該過一下0.45 μm的濾膜。流動相的容器和在線過濾器也得定期清洗，別讓顆粒雜質(zhì)堆積。常規(guī)的硅膠基質(zhì)鍵合相填料，適合在pH 2.0-8.0的環(huán)境中使用；要是分析堿性化合物，選BDS C18填料更合適，它能耐受pH 2.0-10.0的范圍。不過，要是在pH臨界值附近用了柱子，用完盡快用合適的溶劑清洗干凈。

樣品處理

樣品得提前預(yù)處理，比如用樣品過濾器或者預(yù)處理柱（SPE）處理。遇到難處理的樣品，加個保護(hù)柱能減少很多麻煩。另外，做正相色譜分析時，所有溶劑和樣品都得嚴(yán)格脫水，不然會影響分析結(jié)果。

表 1：色譜柱使用關(guān)鍵要點(diǎn)

二、色譜柱保存方法

日常保養(yǎng)

每次用了緩沖液或者含鹽的流動相后，先拿 10% 甲醇 / 水沖洗柱子 30 分鐘，把鹽分沖掉，之后再用純甲醇沖洗 30 分鐘。這里要注意，別用純水直接沖，容易引起填料塌陷，反而損壞柱子。

長期保存

不同類型的柱子，保存方式不一樣：反相柱要泡在純甲醇或者乙腈里；正相柱得放在脫水的純正己烷中；離子交換柱則保存于含疊氮化鈉的水溶液里。保存時記得把柱子原裝的堵頭堵好，放在室溫環(huán)境下就行。

表 2：色譜柱保存規(guī)范

三、色譜柱再生處理

反相柱再生

按順序用20-30倍柱體積的溶劑沖洗：先用甲醇/水（10/90，V/V）溶液沖洗，再用乙腈沖，然后用異丙醇沖；完成后，反順序按異丙醇、乙腈、甲醇/水溶液的再沖一遍。

正相柱再生

同樣用20-30倍柱體積的溶劑依次沖洗：先正己烷，再異丙醇、二氯甲烷，后甲醇；隨后反過來按甲醇、二氯甲烷、異丙醇、正己烷的順序再沖。特別提醒，所有用到的溶劑都必須嚴(yán)格脫水，一點(diǎn)水分都不能有。

表 3：色譜柱再生流程

四、常見問題與解決方案

柱壓異常升高

遇到柱壓莫名升高，大概率是這幾個原因，對應(yīng)處理就行：

篩板堵塞：要么反沖色譜柱，要么把柱頭拆下來超聲清洗 —— 用 10% 稀硝酸超聲 10 分鐘，之后再用純水超聲 10 分鐘。

填料污染：把柱頭前端被污染的填料換掉就行。

鹽結(jié)晶：先用 10% 甲醇 / 水沖洗，把結(jié)晶溶解掉，之后再換高濃度甲醇繼續(xù)沖。

pH 不合適：要是因?yàn)閜H不合適導(dǎo)致固定相結(jié)構(gòu)受損，這種情況通常很難恢復(fù)，只能平時多注意色譜柱的pH適用范圍。

表 4：柱壓異常升高問題處理

其實(shí)只要用對方法、做好維護(hù)，不僅能延長色譜柱的使用壽命，更能讓每一次分析結(jié)果都穩(wěn)定準(zhǔn)確，少走不少實(shí)驗(yàn)彎路。